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MTT法测24孔板时 细胞数多 二甲基亚砜(DMSO)溶解甲瓒后溶液颜
来源:本站原创   更新时间:2019-09-11 浏览次数:

  MTT法测24孔板时 细胞数多 二甲基亚砜(DMSO)溶解甲瓒后溶液颜色深的孔 吸光度反而低

  MTT法测24孔板时 细胞数多 二甲基亚砜(DMSO)溶解甲瓒后溶液颜色深的孔 吸光度反而低

  MTT法测24孔板时细胞数多的,二甲基亚砜(DMSO)溶解甲瓒后溶液颜色深的孔吸光度反而低。而细胞几乎死光了,溶液颜色很浅的孔吸光度反而高。不知道是什么原因?酶标仪软件界面有24孔板...

  MTT法测24孔板时 细胞数多的,二甲基亚砜(DMSO)溶解甲瓒后溶液颜色深的孔 吸光度反而低。而细胞几乎死光了,溶液颜色很浅的孔吸光度反而高。不知道是什么原因?

  酶标仪软件界面有24孔板的选项,说明它可以检测24孔板对吧?展开我来答

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  知道合伙人教育行家采纳数:74644获赞数:206522无锡机电分院数学教研室主任 无锡机电分院文化课科研指导委员 无锡机电分院骨干教师负责人向TA提问展开全部MTT原理

  x09MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法.其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能.二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量.在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比.该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等.它的特点是灵敏度高、经济. 缺点:由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测.这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害.

  MTT 溶液的配制方法 通常,此法中的MTT 浓度为5mg/ml.因此,可以称取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中,用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放4℃ 避光保存即可.在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住.实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光,觉得这样比较好. 需要注意的是,MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝对数.在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内.

  x09MTT一般最好现用现配,过滤后4C避光保存两周内有效,或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存,避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解.我一般都把MTT粉分装在EP管里,用的时候现配,直接往培养板中加,没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了.

  x09MTT有致癌性,用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌,MTT对菌很敏感;往96孔板加时不避光也没有关系,毕竟时间较短,或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.

  普通MTT法实验步骤:1:接种细胞:用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔1000-10000个细

  x09胞接种到96孔板,每孔体积200ul.2: 培养细胞:同一般培养条件,培养3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间).3:呈色:培养3-5天后,每孔加MTT(噻唑蓝)溶液(5mg/ml用PBS配制,pH=7.4)20ul.继续孵育4 h,

  x09终止培养,小心吸弃孔内培养上清液,对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液.

  x09每孔加150ul DMSO,振荡10min,使结晶物充分融解.4:比色:选择490nm波长,在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以时间为

  药物MTT法实验步骤贴壁细胞:1: 收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度 1000-

  x0910000 孔,(边缘孔用无菌PBS填充).2: 5%CO2,37℃孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板),加入浓度梯度的药物,原则上,

  x09细胞贴壁后即可加药,或两小时,或半天时间,但我们常在前一天下午铺板,次日上午

  x09可先离心后弃去培养液,小心用PBS冲2-3遍后,再加入含MTT的培养液.5: 终止培养,小心吸去孔内培养液.6: 每孔加入150ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解.在酶联免

  x09疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值.7: 同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介

  悬浮细胞:1: 收集对数期细胞,调节细胞悬液浓度1×106/ml,按次序将①补足的1640(无血清)培

  WST-1,培养4 h后可跳过步骤4),直接酶联免疫检测仪OD570nm(630nm校准)测量各孔的吸光值)

  x094、离心(1000转x10min),小心吸掉上清,每孔加入100 ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10 min,使结晶物充分溶解.在酶联免疫检测仪OD570nm(630nm校准)测量各孔的吸光值.

  x095、同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜DMSO),对照孔(细胞、民生银行信用卡额度高吗民生银行信用卡额度一般是多少,相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜),每组设定3复孔.

  注意事项:(1) 选择适当得细胞接种浓度.(2) 避免血清干扰:一般选小于10%的胎牛血清的培养液进行试验.在呈色后尽量吸尽孔

  x09内残余培养液.(3) 设空白对照:与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照.其他试验步骤保持一致,

  (4) MTT实验吸光度最后要在0-0.7之间,超出这个范围就不是直线孔板培养细胞做MTT测细胞活力,应该加多少1640培养基,多少MTT和DMSO合适

  x09(6) 一般每孔4000个细胞为宜,既细胞浓度在20000个/ml,MTT加20ul,作用四小时后洗掉上清液,注意不要将甲瓉洗掉,然后每孔加150ul DMSO,在脱色摇床上振荡10分钟,然后测吸光值.

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